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      酵母表達純化服務

      酵母蛋白表達系統是一種最經濟高效的真核蛋白表達系統,可以成功實現胞內表達或是分泌表達,且酵母表達系統放大培養基相對廉價,培養條件要求不高,適宜工業放大。

      哺乳動物細胞表達系統能夠表達出接近天然蛋白的高質量蛋白,但是表達量低,培養基成本過高及培養條件相對苛刻,限制了哺乳動物細胞表達系統用于制備高質量蛋白原料的推廣應用。酵母蛋白表達系統和哺乳動物細胞表達系統一樣,作為真核表達系統能很好整合哺乳動物細胞表達系統的優點。能夠對所表達蛋白進行例如糖基化、?;?、脂基化、磷酸基化等保證蛋白天然構象的修飾。用于制備非常接近天然蛋白的具有高附加值的蛋白原料,事實證明我們的酵母蛋白表達系統服務經客戶回饋所制備的蛋白原料經下游制備的單抗均具有很好的識別天然蛋白的優良特性。

      我們高效的種子篩選工作能使您的訂單在最短的時間內獲得盡可能的高產。

      華美生物酵母表達系統由多年從事酵母表達操作的實驗人員組成,在酵母表達平臺有很多成功的案例,我們采用自行改造的高效分泌載體:Ppic9k、Ppic9k高效融合載體、PPICZa、PGAPZa、PPaSUMO3,宿主:GS115、KM71、X33的正交組合。另外我們采用PINK系統優化分泌表達信號肽。胞內表達我們采用自行改造的載體Ppic3.5k載體和宿主GS115、KM71、X33的組合,在最大程度上實現表達。

      華美生物在工業菌種改良優化上也有很多成功的經驗,專利的Biobrick技術,可以實現高效體外構建任意拷貝的基因劑量,實現表達量的提高。

      服務優勢

      服務項目 特點優勢
      表達載體構建

      經過改造的表達載體,縮短了篩選周期的同時,大幅提高了高表達菌株獲得幾率;

      可增加His標簽融合表達,方便鑒定與純化,一步親和層析純度即可達95%以上;

      可提供詳細表達純化條件,實驗數據以及菌株。

      高表達菌株篩選
      表達條件優化
      表達并制備蛋白

      服務類型

      酵母蛋白表達服務經濟型套餐

      實驗項目 實驗流程 交付內容 時間
      原核克隆 基因的獲得 核酸電泳圖片 2周
      PCR擴增產物酶切連接到本公司改造過的Ppic9k載體
      轉化DH5α
      重組質粒大量制備
      線性化重組質粒
      2.優化表達 電轉化適宜的酵母宿主 酵母菌落核酸電泳圖 2-3周
      從轉化的平板上隨機挑10株單菌落做PCR鑒定
      3.表達及純化 從PCR鑒定陽性菌落中選取一株做1L體系的放大表達 最終種子表達上清SDS-PAGE圖 1-2周
      發酵液上清處理及一步純化 最終純化產物SDS-PAGE 及western blot
      純化產物SDS-PAGE及western blot 1L上清的純化產

      以下是我們通過華美自行改造的Ppic9k載體和GS115宿主系統成功表達一種酶的經濟型套餐實例。我們自接到訂單至成功表達只用了20個工作日,親和層析一步純化得到蛋白純度在95%以上。

      酵母蛋白表達服務標準型套餐

      實驗項目 實驗流程 交付內容 時間
      原核克隆 基因的獲得 核酸電泳圖片 2周
      PCR擴增產物酶切連接到本公司改造過的Ppic9k載體
      轉化DH5α
      重組質粒大量制備
      線性化重組質粒
      優化表達 電轉化適宜的酵母宿主 酵母菌落核酸電泳圖 5-6周
      用遺傳霉素G418進行多拷貝子篩選
      對多拷貝子克隆進行PCR鑒定
      選取40株多拷貝子進行小量誘導表達 最終種子表達上清SDS-PAGE圖
      表達及純化 選取表達情況最好的,根據客戶需要放大表達 表達上清SDS-PAGE 1-2周
      發酵液上清處理及一步純化 最終純化產物SDS-PAGE及western blot
      純化產物SDS-PAGE及western blot 客戶要求的蛋白表達量

      以下是一個客戶需要做優化表達的標準型訂單服務,客戶要求表達一種藥用蛋白,最后做工藝放大,對表達量有一定的要求,客戶自己做了大量的工作但是表達量一直提不上去,我們從上游開始做表達優化,用了50個工作日,用華美自己改造的Ppic9k載體和KM71H宿主在2.5mg/ml的G418濃度下獲得一株令客戶滿意的工藝放大種子。

      專利的Biobrick技術用于酵母工業菌種改良優化

      實驗項目 實驗流程 交付內容 時間
      原核克隆 基因的獲得 核酸電泳圖片 2周
      PCR擴增產物酶切連接到合適的載體
      轉化DH5α
      重組質粒大量制備
      專利的Biobrick技術體外梯度構建多拷貝基因劑量
      優化表達 線性化重組質粒 酵母菌落核酸電泳圖 5-6周
      電轉化適宜的酵母宿主
      對多拷貝子克隆進行PCR鑒定
      選取40株多拷貝子進行小量誘導表達 最終種子表達上清 SDS-PAGE圖
      表達及純化 選取表達情況最好的,根據客戶需要放大表達 表達上清SDS-PAGE 1-2周
      發酵液上清處理及一步純化 最終純化產物SDS-PAGE及western blot
      純化產物SDS-PAGE及western blot 客戶要求的蛋白表達量

      以下是我們成功完成一個工業酶菌種對產量的優化提高工作,我們利用專利的Biobrick技術一共用了近60個工作日由單拷貝基因劑量構建到8拷貝的基因劑量,表達量由開始的0.5g/L的水平提高到2.4g/L的水平,提高了近5倍。

      Fig. E: single copy gene expression of industrial enzyme from P.pastoris.

      Fig.F: eight copy gene expression of industrial enzyme from P.pastoris

      備注:我們只提供抗HIS標簽抗體用于表達產物的質控,客戶要求用對應蛋白的抗體做western blot,則抗體由客戶自行提供。

      專利的Biobrick技術是集蛋白的高效表達和高活性于一體的新技術,以下是我們成功為一家知名公司開發的診斷試劑原料,應客戶同意,我們公開下列數據:

      N1 122 P1 19523 S1 266
      N2 110 P2 22049 S2 4474
      N3 231 P3 22342 S3 11371
      N4 187 P4 22918 S4 24228
      N5 105 P5 24117 S5 25865
      N6 162 P6 23920 S6 26194
      N7 128 P7 20396 CV1 25762
      N8 129 P8 23952 CV2 25385
      N9 111 P9 24398 CV3 26122
      N10 136 P10 25177 CV4 25314
      N11 196 P11 24194 CV5 24917
      N12 172 P12 24018 CV6 26138
      N13 220 P13 24922 CV7 25599
      N14 139 P14 24965 CV8 26105
      N15 201 P15 24959 CV9 25444
      N16 176 P16 25123 CV10 26237
      N17 528 P17 25811 CV 1.72%
      N18 322 P18 25534
      N19 157 P19 23840
      N20 304 P20 24188

      服務程序

      1. 可在我公司網站內直接下載《酵母表達純化服務合同》并填寫后發至我公司郵箱:tech@cusabio.com;或以傳真的形式發到我公司;

      2. 可電話聯系并詳談有關具體服務要求及服務內容;

      3. 實驗結束后,本公司將提供給客戶的結果詳見《酵母表達純化服務合同》,若客戶有其他要求需提前告知。

      聯系信息

      郵箱:tech@cusabio.com

      電話:+86-27-87582341

      傳真:+86-27-87196150

      合同下載: 酵母表達純化服務合同



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